與香豆素和花菁相比,羅丹明通常更耐光并且對PH值不敏感。被廣泛使用的羅丹明胺包括羅丹明110、四甲基羅丹明(例如TAMRA或TRITC)和X-羅丹明(例如TexasRed)。羅丹明綴合物必須仔細(xì)制備,因?yàn)楫?dāng)多于兩個(gè)或三個(gè)染料分子共價(jià)附于靶分子(例如抗體分子)時(shí),它們特別容易淬滅。
常見羅丹明染料光譜性質(zhì)
表一 四甲基羅丹明(TRITC)光譜性質(zhì)
激發(fā)波長(nm)
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488/532nm激發(fā)
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濾波片組
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TRITC
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Ex(nm)
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552
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Em(nm)
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578
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消光系數(shù)
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85000
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熒光量子產(chǎn)率
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0.1
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圖1.四甲基羅丹明(TEITC)的激發(fā)和發(fā)射光譜
羅丹明反應(yīng)性染料
反應(yīng)性熒光羅丹明和羅丹明衍生物廣泛用于共價(jià)標(biāo)記生物分子,例如抗體、碳水化合物、核酸、蛋白質(zhì)、肽和寡核苷酸。羅丹明共軛物可產(chǎn)生明亮且穩(wěn)定的橙色熒光,常與藍(lán)色、綠色或遠(yuǎn)紅外色熒光探針組合使用,用作檢測酶活性或在多重?zé)晒庋芯恐刑峁Ρ鹊牡孜?。特定的羅丹明和羅丹明衍生物很容易與染料的各種基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)。
表二 可用于標(biāo)記生物分子的反應(yīng)性羅丹明和羅丹明衍生物
品名
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貨號
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規(guī)格
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化學(xué)反應(yīng)性
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反應(yīng)基團(tuán)
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5-羧基羅丹明110
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322
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5mg
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碳二亞胺預(yù)活化后的胺
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羧基
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6-羧基羅丹明110
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323
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5mg
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碳二亞胺預(yù)活化后的胺
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羧基
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5(6)-羧基四甲基羅丹明乙二胺
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354
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25mg
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醛、羧酸、酮
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乙二胺
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5-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯
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373
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5mg
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胺
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琥珀酰亞胺酯
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6-ROX 6-羧基-X-羅丹明
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382
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25mg
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胺
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琥珀酰亞胺酯
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Texas Red-X,琥珀酰亞胺酯
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474
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5mg
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胺
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琥珀酰亞胺酯
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表三 羅丹明標(biāo)記的熒光綴合物
品名
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貨號
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規(guī)格
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生物功能
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Ex/Em(nm)
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鬼筆環(huán)肽-羅丹明標(biāo)記
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23102
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300Tests
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標(biāo)記肌動蛋白微絲
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552/578
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AnnexinV TRITC標(biāo)記
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20031
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100Tests
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檢測細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸(ps)
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544/570
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TRITC-葡聚糖偶聯(lián)物
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21706
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25mg
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心血管,微循環(huán),灌注,細(xì)胞膜通量示蹤劑
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544/570
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TexasRed-鏈霉親和素偶聯(lián)物
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16911
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1mg
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心血管,微循環(huán),灌注,細(xì)胞膜通量示蹤劑
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586/603
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TexasRed山羊抗小鼠lgG(H+L)
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16853
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1mg
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間接檢測小鼠一抗
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586/603
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表四 其他羅丹明指示劑
品名
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貨號
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規(guī)格
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生物功能
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Ex/Em(nm)
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羅丹明123
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22210
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25mg
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活細(xì)胞線粒體指示劑
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508/528
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二氫羅丹明123
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15206
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10mg
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過氧化氫指示劑
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508/528
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羅丹明B
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22211
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10mg
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活細(xì)胞線粒體指示劑
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546/568
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四甲基羅丹明甲酯TMRM
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22221
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25mg
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線粒體膜電位指示劑
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552/574
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TRITC-DHPE
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23301
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1mg
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磷脂示蹤劑
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544/570
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