一、百螢 羥芪巴脒*DNA和RNA染料*簡介

 

羥芪巴脒（也稱為Fluoro Gold）用于染色DNA和RNA。與RNA相比，當(dāng)與DNA結(jié)合時，它表現(xiàn)出明顯不同的熒光發(fā)射譜。該陽離子染料也經(jīng)常用作逆行神經(jīng)元示蹤劑。

圖1.羥芪巴脒*DNA和RNA染料*的化學(xué)結(jié)構(gòu)

二、百螢 羥芪巴脒*DNA和RNA染料*參數(shù)

Ex(nm)        358

Em(nm)        433

分子量        472.54

溶   劑       Water

存儲條件     在-15℃以下保存，避光防潮

CAS          223769-64-0

外觀         黃色粉末

三、百螢 羥芪巴脒*DNA和RNA染料*實驗方案

染色細胞示例

羥芪巴脒的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。主要區(qū)別在于Fluoro-Gold在注射后存活時間，濃度范圍，組織和與其他組織化學(xué)技術(shù)的兼容性方面更靈活。 它比大多數(shù)其他熒光示蹤劑更耐褪色，更亮和熒光時間更長。

1.染料濃度：建議使用1至10％羥基芪脒。初，建議濃度為4％。如果在注射部位發(fā)生壞死，或標記太強，則將濃度降低至2％溶液。

2.染料管理：

2.1壓力注入 - 注射的體積范圍為0.05-1μl，通常為0.1-0.2μl。

2.2結(jié)晶 -可以從微量移液管的施用示蹤劑的晶體。

3.固定劑：可以使用任何固定劑或不使用固定劑，但常使用含有4％甲醛的PBS。含有高濃度重金屬（如鋨，汞）的固定劑會淬滅熒光，而高濃度（超過1％）的戊二醛可能會增加背景熒光。

4.組織化學(xué)處理：含有羥基芪脒的組織可以根據(jù)幾乎任何常見的組織學(xué)技術(shù)進行處理。常使用固定組織的冷凍切片。

5.適用實驗：可以進一步處理切片用于標記，例如放射自顯影，HRP組織化學(xué)，免yi細胞化學(xué)，熒光示蹤劑，熒光復(fù)染劑等。

6.固定、覆蓋：通常將切片安裝在涂有明膠的載玻片上，風(fēng)干，浸入二甲苯中，并用非熒光DPX塑料封固劑蓋上蓋玻片。切片可以用分級醇脫水，除非這與二示蹤劑不相容。如果將羥基噻嗪與熒光免yi細胞化學(xué)組合，則將切片風(fēng)干并直接用DPX蓋上蓋玻片。

7.照相：使用寬帶紫外激發(fā)濾光片（激發(fā) -  323nm，發(fā)射 - 中性pH為620nm），用熒光顯微鏡觀察羥基芪脒。當(dāng)用中性pH緩沖液處理組織時發(fā)出金色，而當(dāng)用酸性（例如PH3.3）pH緩沖液處理組織時發(fā)出藍色。它可以用數(shù)碼或膠片拍攝（使用Ektachrome 200-400 ASA膠片進行彩色打印，使用可比較的速度膠片進行黑白打?。４蠖鄶?shù)曝光時間范圍為10-60秒曝光，具體取決于物鏡放大倍數(shù)和標記強度。三十（30）秒的暴露是平均的?？梢岳枚啻伪┞秮硗瑫r顯現(xiàn)羥基噻嗪和另一種示蹤劑。因此，UV將與明場照明相結(jié)合，以在放射自顯影中同時定位具有HRP或銀顆粒的Fluoro-Gold。類似地，藍光激發(fā)可以組合以也可視化FITC的綠色發(fā)射  顏色，而綠色激發(fā)光可以用于同時觀察碘化丙啶或溴化乙錠（熒光復(fù)染劑）的紅色發(fā)射  顏色。

圖2.羥芪巴脒*DNA和RNA染料*實驗光譜圖