鈣離子指示劑EGTA, AM是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的鈣離子指示劑，EGTA是為被廣泛使用的鈣離子選擇性的螯合劑。它與鈣離子形成的復(fù)合物比與鎂離子形成的復(fù)合物要穩(wěn)定100,000倍。它被用來(lái)制備鈣緩沖液和控制鈣離子的濃度。EGTA, AM是EGTA的乙酰甲酯衍生物，通過(guò)AM法，能被輕易負(fù)載到細(xì)胞中。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的鈣離子指示劑EGTA, AM。
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
操作步驟
1.準(zhǔn)備HHBS緩沖液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高質(zhì)量無(wú)水DMSO中制備2 mM至5 mM EGTA AM * CAS 99590-86-0 *儲(chǔ)備液。
2.1EGTA AM * CAS 99590-86-0 *使用量：1 mg
2.2所需濃度：2 mM
2.3在合適的容器中，將1mg EGTA AM * CAS 99590-86-0 *與747.83μL無(wú)水DMSO混合。
3.使用10μMEGTAAM * CAS 99590-86-0 * 4在HHBS中制備2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1EGTA AM * CAS 99590-86-0 *的孔內(nèi)濃度：5μM
3.2Pluronic®F-127的井內(nèi)濃度：0.04％
3.3孔內(nèi)濃度的丙磺舒：1mM
3.4在合適的容器中混合16μLEGTAAM * CAS 99590-86-0 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下來(lái)，添加HHBS或您選擇的緩沖液，直到體積為3.2 mL。
注意：對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，我們建議EGTA AM * CAS 99590-86-0 *的濃度為4至5μM。
注意：推薦的Pluronic F-127井濃度為0.02％至0.04％。
注意：推薦的濃度為1至2.5 mM的Probenecid。
4.將100μL染料工作溶液加入已經(jīng)含有100μL培養(yǎng)基的所需孔中。
4.1該步驟將染料工作溶液從2X稀釋至1X，并將每種組分的濃度調(diào)節(jié)至以下：5μMEGTAAM * CAS 99590-86-0 *，0.04％Pluronic？F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育20-120分鐘。
5.2將染料加載板在室溫下孵育30分鐘。
6.用1.0 mM Probenecid準(zhǔn)備HHBS緩沖液（或您選擇的緩沖液）。
6.1在合適的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下來(lái)，添加HHBS或您選擇的緩沖液，直到體積為4 mL。
7.用HHBS緩沖液或您選擇的緩沖液替換染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，從所需孔中除去200μL染料工作溶液和培養(yǎng)基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您選擇的緩沖液）。
8.運(yùn)行實(shí)驗(yàn)
8.1為您的樣品添加所需的處理。
8.2以Ex / Em = / nm運(yùn)行實(shí)驗(yàn)。