產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱：Portelite 熒光法RNA定量試劑盒
英文名稱：Portelite? Fluorimetric RNA Quantitation Kit*Optimized for Cytocite? and Qubit? Fluorometers*
產(chǎn)品貨號：17658 17659
產(chǎn)品規(guī)格：100 Tests 500 Tests
儲存條件：保存在冰箱-15℃干燥
保質(zhì)期：12個月
檢測和定量少量 RNA 對于各種生物學(xué)應(yīng)用極為重要，例如在進(jìn)行 Northern 印跡分析、S1 核酸酶測定、RNase 保護(hù)測定、cDNA 文庫制備、逆轉(zhuǎn)錄之前測量體外轉(zhuǎn)錄 RNA 的產(chǎn)量和測量 RNA 濃度PCR、差異顯示PCR。測量核酸濃度常用的技術(shù)是測定 260 nm 處的吸光度。基于吸光度的方法受到蛋白質(zhì)、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物引起的干擾的限制。使用敏感且選擇性的熒光核酸染色劑可以緩解這種干擾問題。 StrandBrite? RNA 定量試劑是一種超靈敏熒光核酸染色劑，用于定量溶液中的 RNA。 StrandBrite? RNA 定量試劑可使用 CytoCite? 或 Qubit? 熒光計檢測低至 5 ng/mL 的 RNA。我們的 StrandBrite? Green 熒光 RNA 定量試劑盒包括我們的 StrandBrite? Green 核酸染色劑和優(yōu)化且穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)方案。它提供了一種定量溶液中 RNA 的便捷方法。
產(chǎn)品光譜圖
激發(fā)(納米)：509
發(fā)射(納米)：527
成分
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成分A：StrandBrite 綠色
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0.25 mL（在DMSO中為200X）
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成分B：測定緩沖液
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1瓶（50ml）
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成分C：RNA標(biāo)準(zhǔn)＃1
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1 mL（RNA：0 ng / μL）
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成分D：RNA標(biāo)準(zhǔn)＃2
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4 X 250 μL（RNA：10 ng / μL）
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實(shí)驗(yàn)方案
樣品分析方案
概述
準(zhǔn)備 StrandBrite RNA 工作溶液
將 190 μL StrandBrite? RNA 工作溶液添加到每個 0.2 mL PCR 管中
將 10 μL RNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品添加到每個管中
室溫孵育2分鐘
使用 CytoCite? 或 Qubit? 熒光計檢測熒光
注：在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件置于室溫下。
溶液配制
StrandBrite? RNA 工作溶液
將 StrandBrite Green（組分 A）在測定緩沖液（組分 B）中稀釋 200 倍。例如，要為 8 個樣品準(zhǔn)備足夠的工作溶液，請將 5 μL StrandBrite Green（組分 A）添加到 1 mL 測定緩沖液（組分 B）中。
注意 用箔紙覆蓋工作溶液或?qū)⑵渲糜诤诎堤?，以避光。我們建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備該溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙降讲ＡП砻妗榱双@得更好的效果，該溶液應(yīng)在制備后幾小時內(nèi)使用。
實(shí)驗(yàn)方案
可接受的樣品體積范圍為 1~20 μL，具體取決于 RNA 樣品的估計濃度。推薦樣品體積為 10 μL，RNA 濃度在 0.01~10 ng/μL 范圍內(nèi)。如果使用其他樣品體積，請調(diào)整濃度計算中的稀釋系數(shù)。
以下實(shí)驗(yàn)方案是基于 10 μL 樣品體積、RNA 濃度在 0.01~10 ng/μL 范圍內(nèi)生成的。
1.將 190 μL StrandBrite Green 工作溶液添加到每個 CytoCite 樣品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。 注意 使用薄壁聚丙烯透明 0.2 mL PCR 管，例如#CCT100。
2.將 10 μL RNA 標(biāo)準(zhǔn)品 #1 和 #2 或測試樣品添加到每個管中，然后通過渦旋 2~3 秒進(jìn)行混合。
3.將所有管在室溫下孵育 2 分鐘。
4.將樣品插入 CytoCite? 或 Quibit? 并用綠色熒光通道檢測熒光。請遵循適用于 CytoCite? 熒光計的程序。
標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的制備（可選）
對于 StrandBrite? 檢測，您可以選擇使用 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品制作校準(zhǔn)曲線。以下是生成定制 RNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線的簡要方案：
1.使用 Assay Buffer 進(jìn)行 1/3 系列稀釋，使用 RNA Standard #2 獲得 10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 和 0 ng/μL RNA 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。
2.將 190 μL StrandBrite? Green 工作溶液添加到每個管中。
3.將 10 μL RNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品加入每個管中，然后渦旋 2~3 秒進(jìn)行混合。
4.將反應(yīng)物在室溫下孵育 2 分鐘。
5.將樣品插入 CytoCite? 并用綠色熒光通道檢測熒光。
產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)圖
圖1。用 StrandBriteTM 綠色熒光 RNA 定量試劑盒生成 RNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線。用綠色熒光通道定量熒光強(qiáng)度，用線性擬合法計算回歸模型。