細胞膜熒光探針DIR是一種細胞膜電位敏感的親脂性陰離子熒光染料,DIBAC4(3)本身無熒光,當進人細胞與胞漿內(nèi)的蛋白質結合后才發(fā)出熒光,DIBAC4(3)進入細胞,細胞內(nèi)熒光強度增加,即膜電位增加表示細胞去極化;反之,細胞內(nèi)熒光強度降低即膜電位降低表示細胞超極化。DiBAC4(3)是目前*常用的線粒體膜電位檢測熒光探針。
保存與使用:粉狀的FLUO-3AM應保存于-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前,F(xiàn)LUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過程可能會比較慢。用無水的DMSO溶解的FLUO-3AM長期保存,應嚴格密封,并保存于-20度。使用前,將保存液放置至室溫后再打開。可避免AM探針在長期的保存過程中水解。
細胞膜熒光探針DIR廣泛用于長波長的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收,可以被氬離子激光的488nm激發(fā)光激發(fā),便于檢測。FLUO-3在沒有同鈣結合的情況下,無熒光產(chǎn)生。但是,在與鈣結合后,熒光(526nm)增強至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結合,結合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光,*大激發(fā)波長為506nm,*大發(fā)射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右,發(fā)射波長為525-530nm。
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